基因敲除

定制化的基因敲除小鼠模型有利于洞察關鍵遺傳機制,加速您的研究。發現基因功能、了解疾病發病機制、推進藥物研發進程。

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利用定制化的基因敲除小鼠模型,洞察關鍵遺傳機制,加速您的研究。

  • 發現基因功能,探索細胞過程

  • 深入了解疾病的發病機制與預防手段

  • 簡化藥物發現中的藥效評估


基因敲除小鼠模型包括:


鼎博彩票生物擁有逾1500種基因修飾小鼠模型,也許您感興趣的基因就在其中,点击查看成品小鼠模型資源庫列表

您也可以聯系我們的技术顾问,为您设计并定制您的基因敲除小鼠模型。




常規基因敲除

建立常規基因敲除(knockout,简称KO)小鼠模型,使您感兴趣的靶基因功能在小鼠所有细胞以及整个生命过程中永久缺失。

通过CRISPR基因編輯技術,构建一个常規基因敲除小鼠模型一般需要4-6个月。

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根据基因序列设计合成sgRNA与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵,Cas9核酸酶、 sgRNA、基因组靶序列结合并切割双链DNA ,通过非同源性末端接合(NHEJ)修复途径造成靶基因的移码突变或片段敲除,从而实现基因敲除。NHEJ修复是随机的,可能在同一小鼠体内不同细胞造成的修复结果不同,F0小鼠需要繁殖一代,获得稳定遗传的敲除杂合子小鼠。


通过ES細胞打靶技术,构建一个常規基因敲除小鼠模型一般需要7-12个月。

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構建以篩選基因新黴素(Neo)取代靶基因的一個或多個外顯子的重組載體,轉入ES細胞,獲得正確發生同源重組的ES克隆。ES細胞進行囊胚注射,獲得部分ES來源的嵌合鼠,嵌合鼠與野生型小鼠交配,最終獲得來源于重組ES細胞的雜合子小鼠。雜合子小鼠一條染色體上的靶基因指定外顯子被Neo基因所取代,雜合子交配獲得靶基因失活的純合子小鼠。



條件性基因敲除

利用條件性基因敲除(Conditional knockout,简称CKO),可以通过时间或组织特异性敲除您感兴趣的靶基因,实现更精准的基因敲除,进行更有针对性的研究。

條件性基因敲除主要是通过染色体位点特异性重组酶系统Cre-LoxP、 FLP-Frt和Dre-Rox来实现的。其中最为常用的是Cre-LoxP系统,在待敲除的一段目的DNA序列的两端各放置一个LoxP序列,得到Flox (Flanked by loxP) 小鼠。将Flox小鼠与特异性表达Cre的工具鼠交配,即可获得具有组织或细胞特异性敲除目的基因的小鼠。

這樣的Flox小鼠避免了全身敲除小鼠可能出現的胚胎或新生致死,並且與不同的Cre工具鼠組合,可以使目的基因的表達或缺失發生在實驗動物發育的任一階段或組織器官。此外,若與控制Cre表達的其他誘導系統相結合,還可以對某一基因同時實現時空兩方面的調控,應用最爲廣泛的是Cre/ERT系統。


通过CRISPR基因編輯技術,构建一个條件性基因敲除小鼠模型一般需要6-9个月。

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通过ES細胞打靶技术,构建一个條件性基因敲除小鼠模型一般需要9-12个月。



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KO first

KO first (Conditional Ready)是一种多用途的模型,与条件敲除策略类似,在目的片段的两侧分别放置方向相同的LoxP位点,同时还在靶片段5’端内含子中放置一个两侧带有FRT位点的SA-IRES-reporter片段。这类小鼠模型主要有两方面用途:

1) 与Cre工具鼠交配可去除Neo基因及Flox区域,成为报告基因(reporter)和基因剔除小鼠,用靶基因的启动子表达reporter基因,通过检测reporter基因的表达即可跟踪靶基因的表达情况;

2) 与Flp工具鼠交配可去除SA-IRES-reporter片段,得到常规的Flox小鼠。而Flox小鼠与各种组织特异的Cre工具鼠交配即可得到各种条件型敲除模型。


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